一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Pfu DNA 聚合酶來源于高溫嗜熱菌 Pyrococcus furiosus ，分子量約 90KD.本產(chǎn)品是從克隆有 Pfu DNA聚合酶基因的大腸桿菌純化而來，具有 5'→3'聚合酶活性及 3'→5'外切酶活性(校正酶活性)。Pfu DNA Polymerase 是公認(rèn)的目前已發(fā)現(xiàn)的熱穩(wěn)定性聚合酶中出錯(cuò)率最低的，因此 Pfu DNA Polymerase 適用于對(duì)保真性要求較高的 DNA 片段的 PCR 擴(kuò)增。Pfu DNA Polymerase 擴(kuò)增所得產(chǎn)物為平末端,需要在其末端加 A 后才能進(jìn)行 T/A 克隆。 經(jīng)檢測(cè)無外源核酸酶活性;SDS-PAGE 檢測(cè)純度高于 95%；PCR 檢測(cè)無外源 DNA 殘留；以λDNA 為模板，可有效擴(kuò)增 3 kb 以下的 DNA 片段,以人 DNA 為模板，成功擴(kuò)增出 1.8 kb DNA 片段。
二、單位定義：
１單位 Taq DNA 聚合酶定義為在 72℃,30 分鐘內(nèi)將 10nmol 同位素標(biāo)記的全核苷酸摻入到 DE81 脂不溶物質(zhì)中所需的酶量。
三、應(yīng)用范圍：
1.常規(guī) PCR 擴(kuò)增 2.基因的高保真擴(kuò)增,克隆及表達(dá) 3.基因的定點(diǎn)突變
四、酶儲(chǔ)存緩沖液：
50 mM Tris-HCl(pH 8.3)         100 mM KCl         1 mM DTT         0.1 mM EDTA    Stabilizers         50% glycerol
五、10× Pfu PCR  Buffer 
200mM Tris-HCl (pH 8.8)          100 mM KCl       100mM (NH4)₂SO₄        20mg SO₄        1% Triton X-100         1mg/ml BSA
? 10× Pfu PCR Buffer分為含Mg²⁺和不含Mg²⁺兩種，不含Mg²⁺的buffer，配有20mM的MgCl₂
? 另有不含Triton X-100 的 10×Pfu PCR buffer （DF Free）可供選擇，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選用
六、注意事項(xiàng)：

•  Pfu 具有３'→５'外切酶活性，所以擴(kuò)增延伸速度遠(yuǎn)比 Taq 酶低，應(yīng)根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)短設(shè)置相應(yīng)的延伸時(shí)間，一般情況下 Pfu 酶的延伸速度為 0.5～1 Kb/min。
•  Pfu 的３'→５'外切酶活性可能講解引物，應(yīng)先加 dNTPs 后，再加酶到反應(yīng)體系中，并立即進(jìn)行反應(yīng)。

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